R&D Systems 抗体验证

R&D Systems Antibody Validation

为确保结果可重现而进行的抗体验证与质量控制

生命科学研究和诊断开发在很大程度上依赖靶向试剂抗体,这显示了其作为基础生物学工具的重要性。

然而,商业抗体试剂通常无法发挥可靠的预期作用。抗体性能不一致且不可靠,这是导致实验结果重现性差的主要原因之一。评估结果显示,约50%的抗体产品要么无法和靶标有效结合、难以在各种实验应用中发挥作用,要么存在脱靶结合问题。

生命科学和诊断团队需要一个完全值得信赖和依赖的抗体供应商,确保在每次订购时,都能获得所有靶点对应的可重复性抗体产品。

作为抗体开发和验证领域的公认领导者,R&D Systems认真对待抗体可重复性的挑战。R&D Systems根据数十年的抗体设计、开发和生产经验,不断提升和规范抗体质量控制分析流程。

我们结合经过严格审查的研发与生产工艺,采用以实验应用为导向的抗体验证流程,确保提供可覆盖广泛抗体目录的卓越品质与可靠性能,为全球研究人员提供针对各类靶点设计且经过验证的试剂。

R&D Systems抗体:卓越品质,成熟应用

每一种R&D Systems抗体产品,无论是现货还是定制产品,均是通过我们专属的开发流程和验证工作流程生产的。为了向客户提供具有可重复应用性能的抗体,R&D Systems采用三种核心技术方法:

  1. 合理的免疫原设计
  2. 多元化免疫策略
  3. 增强的验证与确认

1. 合理的免疫原设计

要生产出有重现性、并且性能优异的抗体,首先需要慎重选择免疫原。R&D Systems设计的免疫原能够产生更优质的抗体。

我司内部蛋白质专家负责指导免疫原的设计,通常选择在哺乳动物细胞中表达的全长蛋白质。我公司通过这种方式,可确保免疫原正确折叠、具有生物活性并经过适当的糖基化修饰,使其表现与在天然状态下完全一致。尽管和多肽或蛋白片段免疫原方法相比,这更具挑战性,但通过我公司工艺生产的抗体适用于客户检测需求。

1. Rational Immunogen Design

所得抗体有高度选择性、高亲和力及良好的生物学相关性。虽然全长蛋白免疫原通常有理想的效果,但在许多情况下,针对特定抗体靶标或应用,也需要设计肽和全细胞免疫原。后者对于结合膜结合受体(如靶向GPCR的抗体)非常有价值。

2. 多元化免疫策略

选定免疫原后,我们的科学家致力于研究哪种免疫策略最适合目标抗体。经过多年的研发,我们已建立多种免疫方案。由于产生的抗体特性各异,多元化的选择有助于筛选出性能最优的抗体。

R&D Systems还可使小鼠、家兔和山羊等各种动物免疫。我们甚至可以用相同的免疫原使多种宿主免疫,并通过研究由此产生的抗体,针对特定应用收集最优方案。

3. 增强的验证与确认

R&D Systems进行广泛的内部验证,高度关注客户应用,确保提供符合最高标准的抗体重现性。

以应用为导向的抗体验证

在我们的验证周期内,会探索抗体在蛋白印迹、流式细胞术、免疫组化及其他免疫分析等相关应用中的性能。为研究特异性,使用内部开发的大量免疫原库,检测所有抗体与密切相关分子的交叉反应。如适用,我们进一步验证 阻断、中和及受体激活等功能检测结果,以确认生物学活性。

R&D Systems使用客户在实验中常用的原代细胞、细胞系、转染细胞和组织微阵列开展此类应用验证研究。

R&D Systems还针对我公司的内部技术平台(如Lunaphore COMET和Simple Western)进行验证。这让使用或计划使用我公司仪器平台的客户更加确信抗体性能符合预期。

 Enhanced Validation & Verification

细胞生物学测定

为进一步评估特异性,R&D Systems还进行细胞分析,以确认仅在存在靶标时才发生结合,从而避免脱靶或非特异性结合。

根据大多数抗体验证专家的建议,这应从细胞研究开始,比较野生型细胞和缺乏靶标的同基因敲除细胞系。在此情况下,仅野生型细胞显示抗体结合。同样地,我公司的抗体质量控制团队也会采用生物学或化学刺激检测法,确认靶点结合仅在合适的生物学环境中发生。以我公司的Hif-1α抗体为例,该抗体仅在缺氧条件下才发生结合,因为仅在缺氧条件下表达。

Western Blot of human HIF-1 alpha specificity

蛋白免疫印迹分析结果显示人源HIF-1α/HIF1Aα/HIF1A具有特异性。蛋白免疫印迹分析结果显示未经处理(-)或经1 mM DFO过夜处理(+)的野生型和HIF-1α/HIF1A基因敲除细胞系(KO)的裂解液情况。取PVDF膜,使用1 µg/mL小鼠抗人/小鼠/大鼠HIF-1α/HIF1A单克隆抗体(货号 MAB1536)进行一抗孵育,随后加入HRP标记的抗小鼠IgG二抗(货号 HAF018)进行二抗孵育。实验以GAPDH(货号 MAB5718)作为上样内参。

持续的抗体质量控制与批次确认

为确保性能的稳定性,R&D Systems对后续各批次产品进行抗体验证检测,并以验证标准品为对照进行检测。通过重复检测各批次,我们能够帮助客户获得可重现的实验结果。如果杂交瘤细胞漂移或其他变化导致不同批次抗体性能不一致,我们将立即停止该产品的生产,并开发出相应的替代品。

外部抗体表征合作伙伴

由于抗体的可重复性影响着每个人,所以抗体供应商和研究人员需要携手合作,共同提高标准。R&D Systems会继续与外部合作伙伴紧密合作,以主导加强抗体验证的举措。

YCharOS Logo

YCharOS是一家以公益为宗旨的开放性科学公司,其使命是对每种人类蛋白质的市售抗体试剂进行全面表征。

请查阅这篇在Nature Protocols上发表的YCharOS相关论文,该文介绍了一个基于共识构建的抗体表征平台,我公司的抗体专家团队也为此提供了专业意见。

Human Cell Differentiation Molecules (HCDM) Logo

Human Cell Differentiation Molecules (HCDM)是一个举办人类白细胞分化抗原(HLDA)学术讨论会的组织,对CD分子进行命名和表征。

HLDA指定由R&D Systems开发的大量抗体克隆为明确的CD标志物。浏览我公司经HLDA认证的CD标志物。

引用文献与客户评价

除了内部验证外,客户体验也是我公司抗体重复性工作中重要的反馈环节。为保持透明度,我公司在产品组合中每个产品的页面上展示文献引用和用户评价,使用户可以了解其他客户如何成功地使用我公司的抗体开展实验。请在产品页面查看这些显示客户如何使用我公司抗体的关键指标。

  Citations and Customer Reviews

100%保障与专业技术支持

在抗体发货后,R&D Systems仍会继续针对我公司的抗体产品承担责任,并提供100%的性能保证。若特定产品性能不稳定,我们可为客户办理退款或免费更换产品。

如果您在使用我公司抗体产品的过程中有任何问题,我公司的技术支持团队随时为您提供帮助和解答。