精品流式抗体
流式细胞抗体
流式细胞术是一种常用的基于激光的技术，在单细胞悬液中能够对细胞进行计数、分类并鉴定表型。Bio-Techne旗下R&D Systems以及Novus两个子品牌提供抗体以及辅助试剂和工具，以简化您的流式细胞术实验。
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| 流式鉴定试剂盒 | 试剂盒内主要产品 | 货号 |
| SOX2-PE Mouse IgG2A; Clone 245610 | FMC001 | |
| Oct-3/4-APC Rat IgG2B; Clone 240408 | ||
| SSEA-4-CFS Mouse IgG3; Clone MC-813-70 | ||
| SSEA-1-PerCP Mouse IgM; Clone MC-480 | ||
| CD34-APC Mouse IgG1; Clone QBEnd10 | FMC019 | |
| SCF R/CD117-PE Mouse IgG1; Clone 47233 | ||
| CD38-PerCP Mouse IgG2A; Clone 240742 | ||
| CD11b-CFS Mouse IgG2B; Clone 238446 | ||
| CD90-APC Mouse IgG2A; Clone Thy-1A1 | FMC020 | |
| CD73-CFS Mouse IgG2B; Clone 606112 | ||
| CD105-PerCP Mouse IgG1; Clone 166707 | ||
Negative Marker Cocktail: • CD45-PE Mouse IgG1; Clone 2D1 • CD34-PE Mouse IgG1; Clone QBEnd10 • CD11b-PE Mouse IgG2B; Clone 238446 • CD79A-PE Mouse IgG1; Clone 706931 • HLA-DR-PE Mouse IgG1; Clone L203 | ||
| CD105/Endoglin-PerCP Mouse IgG1; Clone 166707 | FMC002 | |
| CD146/MCAM-CFS Mouse IgG1; Clone 128018 | ||
| CD90/Thy1-APC Mouse IgG2A; Clone Thy-1A1 | ||
| CD45-PE Mouse IgG1; Clone 2D1 | ||
| CD105/Endoglin-CFS Rat IgG2A; Clone 209701 | FMC003 | |
| CD29/Integrin β1-PE Rat IgG2A; Clone 265917 | ||
| Sca-1-APC Rat IgG2A; Clone 177228 | ||
| CD45-PerCP Rat IgG2B; Clone 30-F11 | ||
| FoxP3 Alexa Fluor® 647 Mouse IgG1 (Clone 376209) | FMC015B | |
| CD25/IL-2 Rα-PE Mouse IgG1(Clone 745520) | ||
| CD4-Fluorescein Mouse IgG2A (Clone OX-38) | ||
| Human/Mouse FoxP3-PE Rabbit IgG; Clone 1054C | FMC022 | |
| Mouse CD4-FITC Rat IgG2B; Clone GK1.5 | ||
| Mouse IL-2 Rα/CD25-APC Rat IgG2A; Clone 280406 | ||
| Human/Mouse FoxP3-PE Rabbit IgG; Clone 1054C | FMC021 | |
| Human CD4-FITC Mouse IgG2A; Clone 11830 | ||
| Human IL-2 Rα/CD25-APC Mouse IgG2A; Clone 24212 | ||
| Mouse Th1 Cells | CD4-PE Rat IgG2B; Clone GK1.5 | FMC010 |
| IL-12 Rβ2-APC Mouse IgG1; Clone 305719 | ||
| IFN-γ-CFS Rat IgG2A; Clone 37895 | ||
| T-bet-PerCP Mouse IgG1; Clone 525803 | ||
| Human Th1 Cells | CD4 Alexa Fluor® 700 Mouse IgG2A (Clone 11830) | FMC009B |
| TIM-3 Alexa Fluor® 594 Rat IgG2A (Clone 344823) | ||
| IL-12 Rβ2-PE Mouse IgG1 (Clone 305719) | ||
| IFN-γ-PerCP Mouse IgG2B (Clone 25723) | ||
| T-bet Alexa Fluor® 488 Mouse IgG1 (Clone 525831) | ||
| Mouse Th2 Cells | STAT6-APC, Mouse IgG2A; Clone 253906 | FMC012 |
| IL-5-PE, Rat IgG1; Clone TRFK5 | ||
| IL-4 R-CFS, Goat IgG; Antibody-Purified Polyclonal Antibody | ||
| CD4-PerCP, Rat IgG2B; Clone GK1.5 | ||
| Human Th2 Cells | CD4 Alexa Fluor® 700 Mouse IgG2A (Clone 11830) | FMC011B |
| IL-10 Alexa Fluor® 488 Rabbit IgG (Clone 2050B) | ||
| CCR3-PE Rat IgG2A (Clone 61828) | ||
| GATA-3 Alexa Fluor® 594 Mouse IgG2B (Clone 634919) | ||
| Phospho-STAT6 Alexa Fluor® 647 Rabbit IgG (Clone 1248D) | ||
| Human Th17 Cells | CD4 Alexa Fluor® 594 Mouse IgG2A (Clone 11830) | FMC007B |
| IL-17A Alexa Fluor® 700 Mouse IgG2B (Clone 41809) | ||
| RORα-PE Mouse IgG2B (Clone 784652) | ||
| RORγt Alexa Fluor® 488 Rabbit IgG (Clone 1181A) | ||
| CXCR6 APC Mouse IgG2B (Clone 56811) | ||
| BDCA-3/CD141-PE Mouse IgG1 (Clone 501733) | FMC016 | |
| BDCA-1/CD1c-APC Goat IgG | ||
| CD11c-CFS Mouse IgG1 (Clone ICRF 3.9) | ||
| CD16/Fcγ RIII-PerCP Mouse IgG2A (Clone 245536) | ||
| NK Cell Killing Assay | hCD3ε Alexa Fluor® 405 antibody | FMC032 |
| hLAMP-1/CD107a PE antibody | ||
| mIgG2b PE antibody | ||
| hCD56 Alexa Fluor® 700 antibody | ||
| Mito Mark Target Cell Dye（FITC） | ||
| Janelia Fluor® NK Cell Dye（APC） | ||
| Viability Staining Dye（AmCyan） | ||
| Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | 4830-250-K | |
| FlowTACS Flow Cytometry Apoptosis Detection Kit | 4817-60-K |
1.2 Flow Cytometry Panel:
| 流式鉴定组合Panel | Marker | 克隆 | 荧光 | 货号 |
| NK Cell Phenotype | CD3 | UCHT1* | Alexa Fluor® 405 | FAB100V |
| NCAM1/CD56 | 2524C | Alexa Fluor® 647 | FAB24086R | |
| NKp30/NCR3 | 210845* | Alexa Fluor® 488 | FAB1849G | |
| NKG2D/CD314 | 149810* | Alexa Fluor® 700 | FAB139N | |
| NKp46/NCR1 | 195314* | PE | FAB1850P | |
| Fc Gamma R III (CD16) | 245536 | PerCP | FAB2546C | |
| CD3 | UCHT1* | Alexa Fluor® 405 | FAB100V | |
| NCAM1/CD56 | 2524C | Alexa Fluor® 647 | FAB24086R | |
| Granzyme B | 351927 | Alexa Fluor® 488 | IC2906G | |
| Granzyme K | 2471A | Alexa Fluor® 594 | IC10216T | |
| Perforin-1 | 1031751 | Alexa Fluor® 750 | IC103853S | |
| Fc Gamma R III (CD16) | 245536 | PerCP | FAB2546C | |
| CD3* | UCHT1 | Alexa Fluor® 405 | FAB100V | |
| CD4 | 11830 | PerCP | FAB3791C | |
| CD25/IL-2Rα | 24212 | PE | FAB1020A | |
| CD127/IL-7R | 40131 | Alexa Fluor® 700 | FAB306N | |
| GITR/TNFRSF18 | 110416 | FITC | FAB689F | |
| FoxP3 | 376209 | Alexa Fluor® 647 | IC8970P | |
| HLA-DR | L203 | Alexa Fluor®405 | FAB4869V | |
| CD86 | 37301 | FITC | FAB141F | |
| CD11c | ICRF 3.9 | PE | FAB1777P | |
| CD123 | 32703 | PerCP | FAB301C | |
| CD16 | 245536 | APC | FAB2546A | |
| CD20 | 396444 | Alexa Fluor®700 | FAB4225N | |
| CD3 | UCHT1* | Alexa Fluor®700 | FAB100N | |
| CD56 | 2524C | Alexa Fluor®700 | FAB24086N | |
| CD14 | 134620 | Alexa Fluor®750 | FAB3832S | |
| CD38 | 240742 | APC | FAB2404A | |
| CD11c | ICRF 3.9 | PE | FAB1777P | |
| HLA-DR | L203 | PerCP | FAB4869C | |
| CD86 | 37301 | FITC | FAB141F | |
| NCAM1/CD56 | 2524C | Alexa Fluor®700 | FAB24086N | |
| CD20 | 396444 | Alexa Fluor®405 | FAB4225V | |
| CD3 | UCHT1* | Alexa Fluor®405 | FAB100V | |
| VEGF | 23410 | APC | IC2931A | |
| SR-AI/MSR/CD204 | 351615 | PE | FAB2708P | |
| CD163 | 215927 | PerCP | FAB1607C | |
| MMR/CD206 | 685641 | Alexa Fluor®488 | FAB25342G | |
| NCAM-1/CD56 | 2524C | Alexa Fluor®700 | FAB24086N | |
| CD20 | 396444 | Alexa Fluor®405 | FAB4225V | |
| CD3 | UCHT1* | Alexa Fluor®405 | FAB100V | |
| CD3 | UCHT1* | Alexa Fluor® 405 | FAB100V | |
| CD19 | 4G7-2E3 | PE | FAB4867P | |
| CD45 | 2D1 | Alexa Fluor® 647 | FAB1430R | |
| CD3 | UCHT1* | Alexa Fluor® 405 | FAB100V | |
| CD4 | 11830 | FITC | FAB3791F | |
| CD8 | 37006 | APC | FAB1509A | |
| CD19 | 4G7-2E3 | PE | FAB4867P | |
| CD56 | 2524C | Alexa Fluor® 700 | FAB24086N | |
| CD3 | UCHT1* | Alexa Fluor® 405 | FAB100V | |
| CD4 | 11830 | FITC | FAB3791F | |
| CD8 | 37006 | APC | FAB1509A | |
| CD19 | 4G7-2E3 | PE | FAB4867P | |
| CD56 | 2524C | Alexa Fluor® 700 | FAB24086N | |
| CD16 | 245536 | PerCP | FAB2546C | |
| CD14 | 134620 | Alexa Fluor® 750 | FAB3832S |
1.3 流式辅助试剂
1.4 特色流式检测产品:
质谱流式抗体
质谱流式细胞术是利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。传统的流式技术主要基于对荧光染料的检测，当多种荧光染料一起检测时，由于荧光基团发射光谱较宽，容易发生重叠，限制了检测通道数量（<20个）；同时，它会带来严重的串色问题，很多通道的信号需要复杂的补偿计算，降低检测分辨率
Fluorokines™荧光标记靶点蛋白
探索R&D Systems广泛的Fluorokines产品的，用于检测嵌合抗原受体(CARs)，免疫检查点受体或SARS – CoV-2结合细胞。Fluorokines具有高度特异性，可通过流式细胞术直接对靶分子进行染色和检测。
进一步了解
1.5 其他流式产品:
Bio-Techne还拥有同型对照、染色试剂盒和缓冲液、荧光染料、细胞凋亡试剂盒、用于流式的一抗和二抗，以及 MitoBrilliant™ 新一代荧光染料，用于活细胞和固定细胞中线粒体的定位和标记，与流式细胞术兼容。除此之外，我们提供专用于校准、补偿和细胞计数的磁珠，使用磁珠质控品和标准品有助于确保您的仪器正常运行，并确保您的数据具有可重现性和可靠性。
2. 流式细胞抗体配色
Bio-Techne多选择的偶联荧光染料和标记：
| 激发光(nm) | 偶联标记物 | 最大激发光(nm) | 最大发射光(nm) | 发射光颜色 | 亮度 | |
| Biotin | ||||||
| HRP | ||||||
| UV (350) | Alexa Fluor® 350 | 346 | 442 | 中等 | ||
| UV (350) | DyLight 350 | 353 | 432 | 中等 | ||
| Violet (405) | DyLight 405 | 400 | 420 | 中等 | ||
| Violet (405) | Alexa Fluor® 405 | 401 | 421 | 中等 | ||
| Violet (405) | mFluorTM Violet 450 | 406 | 445 | New! | ||
| Violet (405) | mFluorTM Violet 500 | 410 | 501 | New! | ||
| Violet (405) | mFluorTM Violet 610 | 421 | 613 | New! | ||
| Blue (488) | Alexa Fluor® 488 | 490 | 525 | 中等 | ||
| Blue (488) | DyLight 488 | 493 | 518 | 中等 | ||
| Blue (488) | FITC | 498 | 519 | 中等 | ||
| Blue (488) | Y-G (561) | PE | 498, 565 | 578 | 明亮 | |
| Blue (488) | Y-G (561) | PE/Atto594 | 498,566 | 632 | 明亮 | |
| Blue (488) | PerCP | 482 | 678 | 暗淡 | ||
| Blue (488) | Y-G (561) | PE/Cy5.5 | 498, 566 | 700 | 中等 | |
| Blue (488) | Y-G (561) | PE/Cy7 | 489, 566 | 782 | 中等 | |
| Y-G (561) | Alexa Fluor® 532 | 532 | 554 | 中等 | ||
| Y-G (561) | Janelia Fluor® 549 | 549 | 571 | 明亮 | ||
| Y-G (561) | DyLight 550 | 562 | 576 | 明亮 | ||
| Y-G (561) | Alexa Fluor® 594 | 590 | 617 | 中等 | ||
| Y-G (561) | DyLight 594 | 593 | 618 | 中等 | ||
| Red (633,640) | APC | 650 | 660 | 明亮 | ||
| Red (633,640) | Janelia Fluor® 646 | 646 | 664 | 中等 | ||
| Red (633,640) | DyLight 650 | 652 | 672 | 明亮 | ||
| Red (633,640) | Alexa Fluor® 647 | 653 | 669 | 中等 | ||
| Red (633,640) | DyLight 680 | 692 | 712 | 明亮 | ||
| Red (633,640) | Alexa Fluor® 700 | 696 | 720 | 暗淡 | ||
| Red (633,640) | Alexa Fluor® 750 | 749 | 775 | 中等 | ||
| Red (633,640) | APC/Cy7 | 652 | 790 | 中等 | ||
| Red (633,640) | DyLight 755 | 755 | 776 | 中等 | ||
Key: 'Y-G'= Yellow-Green
1) 仪器配置：在配色之前需要了解仪器的型号配置。（激光器、滤光片通道）
*最大程度地减少荧光溢出和补偿问题。多色检测时充分利用仪器允许的全部荧光染料，尽量选用多激光激发。例如，考虑使用与 AlexaFluor 405（Ex max=401 nm/Em max=421 nm）偶联的抗体以及与 AlexaFluor 647（Ex max=650 nm/Em max=665 nm）偶联的抗体。
2) 根据抗原的表达量选择合适的荧光偶联抗体，使染料的亮度与抗原密度相匹配。
*一般原则是高表达抗原与弱荧光染料配对，亮荧光染料与低表达抗原配对（强配弱，弱配强）。
*如果检测生物样品中浓度未知的抗原或重要分子，则优先挑选强荧光染料。
*(荧光染料相对亮度表) 根据文献查看抗原表达强弱，亮度大小参考染色指数。
*荧光染料的被检测到的强度除了与其本身性质有关，还因仪器的激发光波长、检测器范围和分辨率有所不同。
3) 注意光谱溢漏的影响，尽量避免复合染料带来的假阳性。
*当两种分子共表达于同一细胞，强表达抗原选择对其他通道影响小的荧光染料，弱表达抗原选择受影响小的通道。如405 nm的第一通道、488nm的FITC通道、637nm的APC通道。
*尽量减少上级细胞对下级细胞的干扰。如CD3阳性细胞是CD4阳性细胞的上级细胞，CD3可以受到CD4的荧光信号干扰，而CD4标记相反。可以通过光谱查看器来了解每个通道内每种染料的光谱重叠。
光谱查看器比较AlexaFluor405与AlexaFluor647的光谱范围，可发现没有重叠。
*除了同一激光器下的染料重叠之外，还需注意不同激光器下的荧光重叠，例如复合染料 PE-Cy5 标记的抗体与 APC 标记的抗体搭配使用，此搭配需较大幅度地调节两者的颜色补偿。因为 Cy5 的激发波长与 APC 的激发波长相近，所以 PE-Cy5 荧光素中的 Cy5，也会被激发 APC 的第二个激光器（氦氖激光器）所激发。
4) 尽量用红色荧光激发自发荧光高的样本。
5) 正式使用前，需提前测试和调试相关参数。
3. 流式实验方案
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